【AbMole科研】功能小鼠和人肝細胞作為3D類器官的長期擴張

AbMole精研抑制劑十年，最新的科研動態不斷與您分享。本期與您分享的是：無功能小鼠和人肝細胞作為3D類器官的長期擴張。

哺乳動物肝臟具有顯著的再生能力。已經描述了兩種損傷反應模式：（1）當所有肝細胞都受到慢性肝病影響時，“卵形細胞”反應從膽管發出。（2） 部分肝切除術 （PHx） 等急性肝損傷時，成熟肝細胞會發生大量增殖反應。雖然卵圓細胞反應已透過從膽管肝細胞中生長的類器官在體外被捕獲，但肝細胞增殖反應尚未在培養物中重現。在這裡，我們描述了為小鼠和人類原代肝細胞建立的長期 3D 類器官培養系統。類器官可以從單個肝細胞建立並生長數月，同時保留關鍵的形態、功能和基因表達特徵。類器官的轉錄譜類似於 PHx 後增殖的肝細胞的轉錄譜。人類肝細胞類器官在移植到小鼠體內後大量增殖，從而重現了肝細胞的增殖性損傷反應。

Figure 1。 Establishment of 3D Culture System of Murine Hepatocyte Organoids

在培養基中添加了Y-27632，並用於類器官的培養呵孵育。詳細來說，分離的肝細胞透過 70毫米過濾器過濾，用冷的 AdDMEM/F12 洗滌兩次，計數並與懸浮板中的 Matrigel 混合。24孔板的每孔使用 20，000-50，000 個細胞。 Matrigel 固化後，加入 Hep-Medium。 Hep 培養基由 AdDMEM/F12（含 HEPES、GlutaMax 和青黴素-鏈黴素）和 15% RSPO1 條件培養基（自制）、B27（不含維生素 A）、50ng/ml EGF、1。25mM 組成 N-乙醯半胱氨酸、10 nM 胃泌素、3 mm CHIR99021、25ng/ml HGF、50ng/ml FGF7、50ng/ml FGF10、1 mM A83-01 、10 mM 煙醯胺和 10 mM Rho 抑制劑Y-27632。接種後14天，類器官被機械破碎並重新接種到新的基質膠中。在培養過程中，最多每三天更新一次培養基。類器官通常每 7-10 天以 1：3 的分流比傳代。

Y-27632 （Abmole， M1817，純度 99。66%） 是一種選擇性的ROCK1（p160ROCK）抑制劑，Ki為140 nM，比對其他激酶包括PKC，cAMP依賴性蛋白激酶， MLCK和PAK的作用強200多倍。 Y-27632也同等有效抑制ROCK-II。Y-27632作用於PKC， cAMP依賴的蛋白激酶和 肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）幾乎沒有活性，Ki分別為26 μM， 25 μM， 和 > 250 μM。Y-27632透過選擇性抑制Ca2+敏感化，而抑制多種興奮劑而不是KCl，包括Phenylephrine， Histamine， Acetylcholine， Serotonin， Endothelin，和Thromboxane誘導的平滑肌收縮，IC50為0。3-1μM。

鳴謝：Huili Hu， et al。 Cell。 2018 Nov 29；175（6）：1591-1606。e19。