AbMole科研快報-富含亮氨酸的Alpha-2-Glycoprotein1基因干擾KASUMI-1細胞凋亡的調節

AbMole精研抑制劑十年，最新的科研動態不斷與您分享。本期與您分享的是：富含亮氨酸的Alpha-2-Glycoprotein1基因干擾KASUMI-1細胞凋亡的調節。

AML細胞具有很強的增殖和抗凋亡能力。本研究的目的是研究沉默富含亮氨酸的α-2-糖蛋白 1 （LRG1） 基因的影響，發現該基因可調節AML細胞系的腫瘤增殖和凋亡。

本研究中，使用質粒干擾技術用於沉默 KASUMI-1 細胞系中的 LRG1 基因。細胞計數試劑盒-8 （CCK-8） 測定用於測試轉導對細胞活力的影響。流式細胞術檢測細胞週期和凋亡。分別應用蛋白質印跡和定量實時聚合酶鏈反應 （RT-qPCR） 檢測蛋白質和 mRNA 的表達水平。對具有 CD34+CD38 表型的 KASUMI-1 細胞透過流式細胞術進行分選。 siLRG1質粒轉染後，LRG1表達水平下調，細胞活力降低。 LRG1 基因的沉默阻止 KASUMI-1 細胞處於 G0/G1 期並促進細胞凋亡。進一步的實驗發現，LRG1 基因沉默顯著下調細胞週期相關蛋白和抗凋亡蛋白，同時上調促凋亡蛋白。 LRG1 基因表達的下調也會抑制 JAK-STAT 通路的訊號轉導。LRG1基因沉默調節細胞週期蛋白和凋亡相關蛋白的表達，降低細胞活力，促進凋亡，可能是透過抑制JAK-STAT通路。

Phosphatase inhibitors（Abmole，M7528）被用於防止研究中蛋白和脂類的磷酸化狀態丟失，為蛋白磷酸化提供更加全面的保護，以更好地進行Western blot等實驗。

Figure 2。 Effects of siLRG1 plasmid on the expression of LRG1 and cell viability in KASUMI-1 cells。 KASUMI-1 cells were transfected with PBS （control group）， negative-siRNA plasmid （NC group）， siLRG1 plasmid （siLRG1 group）。

為了研究 siLRG1 質粒的轉染效率，RT-qPCR 和蛋白質印跡被應用於研究轉染效率。結果表明，轉染後siLRG1 mRNA和蛋白表達水平顯著降低（P<0。01）。 這表明我們的質粒構建和轉染是成功的。

Figure 3。 Effect of siLRG1 plasmid transfection on cell cycle。

為了研究G0/G1中細胞阻塞的原因，應用蛋白質印跡分析和RT-qPCR來評估細胞週期相關蛋白Cyclin D1和PCNA的表達。 結果顯示LRG1基因沉默顯著下調Cyclin D1和PCNA基因和蛋白的表達（P<0。01）。這表明在沉默LRG1基因後，KASUMI-1細胞透過下調細胞週期蛋白D1和PCNA的表達水平而在G0/G1期停滯。

鳴謝：Shishan Xiao， et al。 Med Sci Monit。 2018 Nov 20；24：8348-8356。