AbMole科研-1, 25-二羥基-維生素D3上調T細胞Ig-粘蛋白-3表達

AbMole

精研抑制劑十年，最新的科研動態不斷與您分享。本期與您分享的是：

1，25-

二羥基

-

維生素

D3

透過上調

T

細胞

Ig-

粘蛋白

-3

表達誘導巨噬細胞極化為

M2

。

巨噬細胞極化在受

T

細胞免疫球蛋白

-

粘蛋白

-3 （Tim-3）

調節的免疫調節中起重要作用。本研究的目的是探討

1，25-

二羥基維生素

D3 ［1，25（OH）2D3］

在巨噬細胞極化中的作用。應用質粒轉染技術製備具有沉默或過表達

Tim-3

基因的

RAW264。7

細胞。

ELISA

用於檢測巨噬細胞分泌的炎症因子水平。透過蛋白質印跡分析確定蛋白質水平。使用逆轉錄定量聚合酶鏈反應評估

mRNA

的表達水平。已確定

1，25（OH）2D3

上調

Tim-3

水平並促進白細胞介素

（IL）-10

的分泌。還觀察到

1，25（OH）2D3

增加轉化生長因子

-

β

的水平並抑制腫瘤壞死因子

-

α

和

IL-6

。結果還表明，

Tim-3

基因沉默誘導巨噬細胞極化為經典啟用的巨噬細胞

（M1）

，

Tim-3

基因的過度表達誘導巨噬細胞極化為替代啟用的巨噬細胞

（M2）

。

1，25（OH）2D3

處理上調巨噬細胞中

Tim-3

的表達水平，促進細胞向

M2

極化並抑制向

M1

極化。本研究的資料表明，

Tim-3

可能誘導巨噬細胞向

M2

極化，

1，25（OH）2D3

透過上調

Tim-3

產生免疫抑制作用。

Phosphatase inhibitors

（

Abmole

，

M752

）在

Western blot

實驗中用於防止研究中蛋白和脂類的磷酸化狀態丟失，為蛋白磷酸化提供更加全面的保護。

Figure 2。 Effects of 1，25（OH）2D3 on macrophage at 10-8 and 10-7 M concentrations。 RAW264。7 cells were cultured at different 1，25（OH）2D3 concentrations （0， 10-8 and 10-7 M）。

結果表明，

Tim-3

的表達水平在

10-8M

和

10-7M

組中逐漸升高。

然而，雖然

1，25 （OH）2D3

不影響

NOS2

和

COD206

的表達，但它降低了

NOS2 mRNA

水平（

P<0。05

；圖

2E-K

）。該觀察結果表明

1，25（OH）

以劑量依賴性方式促進

Tim-3

表達。

Figure 3。 Effects of Tim-3 gene silencing on macrophages。

Tim-3

基因沉默後，

RAW264。7

細胞分泌的

TNF-

α和

IL-6

水平上調，而

IL-10

和

TGF-

β水平下調（

P<0。01

；圖

3A- D）

。隨著

Tim-3

基因表達的降低，

NOS2 mRNA

和蛋白表達水平較

NC

組和對照組明顯升高，而

CD206 mRNA

和蛋白表達水平顯著降低（

P<0。01

；圖

3E-K

）。這種現象表明

Tim-3

基因的沉默促進了巨噬細胞向

M1

的極化。

Figure 4。 Effects of Tim-3 gene overexpression on macrophages。

此外，還檢查了

Tim-3

過表達對細胞因子的影響。確定

pTim-3

組

TNF-

α和

IL-6

水平較

NC

組降低，

IL-10

和

TGF-

β水平較

NC

升高

組（

P<0。01

；圖

4A-D

）。當

Tim-3

過表達時，

NOS2

的

mRNA

和蛋白表達水平降低，而

CD206 mRNA

和蛋白的表達水平增加（

P<0。01

；圖

4E-K

）。這表明

Tim-3

的過度表達促進了巨噬細胞向

M2

的極化。

鳴謝：

Shuyu Liang， et al。 Mol Med Rep。 2019 May；19（5）：3707-3713。